1975科勒和米尔斯坦的单克隆抗体技术开创了抗体生产和使用的新时代,如图。

(1)单克隆抗体的制备工艺应先用动物细胞融合法将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合,再用动物细胞培养技术筛选融合细胞,筛选出杂交瘤细胞,再进行培养。

(2)图中A细胞是免疫的B淋巴细胞,没有分裂能力,但能分泌特异性抗体。B细胞是骨髓瘤细胞,可以无限增殖。

(3)常用的动物细胞融合方法包括物理方法(离心、振动和电刺激)、化学方法(PEG)和生物方法(灭活病毒)。

(4)HAT培养基是一种选择性培养基。细胞融合的结果可能有三种:B淋巴细胞的自融合细胞、骨髓瘤细胞的自融合细胞和杂交瘤细胞,因此需要用HAT培养基筛选杂交瘤细胞。胰岛素可以加速组织细胞对葡萄糖的摄取和利用,所以在细胞培养时,常常在培养液中加入胰岛素。

(5)培养2周后,筛选出能产生特异性抗体的骨髓瘤细胞,在不同的孔中培养。在此操作前,应将培养的细胞稀释至7 ~ 10细胞/ml,每孔滴入0.1ml细胞稀释液,以保证每孔不超过一个细胞,达到单细胞培养的目的,保证抗体的纯度。

(6)为获得大量单克隆抗体,可将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔进行体内培养,也可采用动物细胞培养技术进行体外培养。

所以答案是:

(1)动物细胞融合

(2)分泌特异性抗体无限增殖

(3)PEG(灭活病毒,电刺激)?

(4)杂交瘤?胰岛素

(5)特异性分泌抗X蛋白抗体,保证每孔不超过一个细胞,从而达到单克隆培养的目的(单细胞培养保证抗体纯度)

(6)体外或体内(体外和体内,体外和体内)