Igm历史
在更广泛的人群中，巨细胞病毒感染可引起全身器官组织的病变，对胎儿和婴儿造成严重损害，甚至死亡，可能与宫颈癌等恶性肿瘤的发病有关。所以知道CMV主动预防巨细胞病毒感染是非常重要的。
[病理学]
病原体
唾液中的病毒属于疱疹病毒亚科，是一种病毒，人类疱疹病毒群。，由分子量约为150X106的线性双链DNA组成。其最大的是由162个壳粒子(病毒壳粒子)组成的二十面体。典型的疱疹病毒结构。单纯疱疹病毒和水痘带状疱疹病毒的形式非常相似，难以区分。
CMV只能在组织培养的人成纤维细胞中增殖，不能在其他动物细胞中生长，而且增殖速度很慢，复制周期为36-48小时，超过疱疹病毒复制周期的8小时。特殊细胞的初步分离需要一个多月的时间，细胞变成了公园的扩展，一个巨大的细胞和细胞核，细胞核的“晕圈”包围着大的嗜酸性包涵体。生物体中的靶细胞是上皮细胞。各种人巨细胞病毒株之间的广泛交叉反应。关于
CMV在20%乙醚中存活达2小时。PH值< 5，或在56℃放置30分钟，或紫外线照射5分钟即可足够灭活。巨细胞病毒感染耐冻融，或-20℃或-50℃保存不稳定。10%家用漂白剂能显著减少其感染。关于
CMV感染的特征是典型的细胞质和细胞核内含物，也称为巨细胞病毒的巨细胞。人体组织中的肥大细胞引起巨细胞包涵体病。
巨细胞病毒是发病机制中的主要感染，它以潜伏状态无限期地存在于宿主细胞中。提示尸检肺、肝、胰腺、唾液腺、中枢神经系统和肠也可能是参与病毒潜伏场所的各种组织器官。先天性感染的严重程度与沉淀抗体的缺乏和T细胞对巨细胞病毒的反应能力有关。儿童和成人外周血巨细胞病毒感染抑制活化细胞毒性T淋巴细胞的表型。如果宿主T细胞的功能受损，潜伏病毒可能会复活并导致各种综合征。组织移植中巨细胞病毒激活引起的慢性疾病刺激。一些强效的T细胞免疫抑制剂，如抗胸腺细胞球蛋白，是临床CMV综合征的高发期。此外，CMV可以用作激活潜伏的HIV感染的功能辅助因子。
急性传染病的感染病人及其传染源。已在血液、唾液、眼泪、尿液、精液、粪便、宫颈和阴道分泌物、乳汁和其他巨细胞病毒中发现。牛奶、唾液和尿液的传播可以持续几周到几年。
易感人群
巨细胞病毒在世界范围内广泛存在，人的易感性范围很广。人类是巨细胞病毒的唯一宿主。
血清学调查:40-100%成人巨细胞病毒抗体流行的季节性趋势。
不同国家，不同经济条件，感染率不一样。在亚洲和非洲，90%的人群被感染，大部分年龄较轻，抗体和感染年龄较早，而西方国家的感染发生在后期。调查还显示，经济收入群体和低收入群体感染率较高。这个70岁的人群，抗体阳性率超过20岁。女性容易发生在20-30岁的男性，50-60岁的男性。35岁以后，男女抗体阳性率基本持平。虽然机体已产生循环抗体，但病毒仍可持续或间歇地被清除，从而引起慢性或隐性感染。
大多数人一生都会感染巨细胞病毒，但主要是无症状隐性感染。成人巨细胞病毒感染与免疫功能密切相关。病毒往往会持续一生，以潜伏感染的形式存在，只有当宿主的免疫状态失衡，如器官和骨髓移植、癌症、数学、怀孕和免疫抑制剂的应用等，潜伏的病毒才能复活。潜伏病毒和无症状携带者的复活可能导致病毒的传播。由于器官移植和免疫抑制治疗，艾滋病患者感染潜伏病毒或免疫激活潜伏病毒和巨细胞病毒的发生率往往很高。
巨细胞病毒的传播途径:
(1)先天性感染:妊娠(宫内感染)，巨细胞病毒可通过胎盘传染给胎儿。
(2)获得性感染(围产期感染):分娩过程中，宫颈分泌物中的病毒可通过产道传染给新生儿。
(3)产后乳汁分泌病毒，可通过母乳喂养直接传染给婴儿。
(4)长期接触，排毒，唾液，尿液，眼泪都可以传播。
(5)同源CMV感染可通过输血和器官移植传播。同源巨细胞病毒感染是严重的输血和器官移植，多次输血或大量输血增加原发和复发感染的风险，器官或骨髓移植后巨细胞病毒感染的风险也高。性传播
(6):由于病毒常存在于泌尿生殖道分泌物中，精液或宫颈分泌物可通过性交直接传播。
由于精液、宫颈分泌物、泪液、粪便(口交力比多、肛吻)的感染。巨细胞病毒感染途径(中央)表1
母亲对胎儿、新生儿、儿童、成人
接触传播
(唾液、尿液)
输血
肝炎
呼吸道感染隐性感染
肝炎
呼吸道感染
& gt
→成熟度差的孩子体重增加，免疫抑制剂缓慢引起的肺炎和
胃肠粘膜
肝炎病毒血症
┌→无创
│BR/>；└→感染→尿糖阳性健康新生儿传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症病毒
传染性单核细胞增多症样疾病→病毒性尿中红细胞增多症、肝功能异常
瞬时血小板/>减少输血的隐性感染
不明原因的发烧和无症状的感染
→系统性巨细胞包涵体疾病
↓
，或者智力迟钝的迹象。
[免疫学杂志]
巨细胞病毒感染可引起免疫功能尤其是细胞免疫功能的下降。CMV感染显著影响胸腺和脾细胞、单核吞噬细胞、NK细胞和CTL细胞的功能。
在实验室中，胸腺和脾脏急性CMV感染的新生豚鼠受到抑制，成年小鼠胸腺和T细胞数量减少，检出88%的胸腺巨细胞病毒。
巨细胞病毒感染影响脾功能，脾淋巴细胞增殖活性降低。ConA刺激脾细胞产生IL-2，显著降低。
& ltBr巨细胞病毒感染引起的免疫抑制与细胞内病毒的复制有关。CMV复制的特点是单核吞噬细胞和巨细胞病毒感染的细胞在免疫反应中最有可能具有单核吞噬细胞、T细胞、B细胞和某些未识别的单核细胞中淋巴细胞的重要调节功能和效应功能。巨细胞病毒感染会损害许多淋巴细胞的免疫功能。关于
巨细胞病毒感染引起的急性单核细胞增多症。外周血淋巴细胞的有丝分裂增殖反应，巨细胞病毒抗原和HSV抗原的减弱，诱导干扰素水平升高，CD4/CD8比值降至1.7±0.70.2+0.2，使T细胞活性下降。改变一些持续时间较长的疾病，10个月后，大部分患者的T细胞亚群比例还没有完全恢复正常。
巨细胞病毒感染的免疫抑制是由大单核细胞感染病毒和CD8细胞功能障碍引起的。单核细胞吞噬细胞在抗CMV免疫中起着重要的作用，它不仅可以直接吞噬防止病毒，更重要的是可以处理免疫反应，电流抗原和细胞因子的分泌、调节和扩增。CMV感染时，单核吞噬细胞功能的影响，巨细胞病毒感染引起的巨噬细胞的吞噬作用减少细胞内氧自由基，FC受体和补体受体表达的变化，具有抗原提呈功能的低档农产品IL- 1也减少IL-1和IL-2反应。Moses等测定胸腺细胞增殖，IL-1活性下降，IL-1生成减少可导致TH/TS细胞失衡。
巨细胞病毒扩散对NK细胞的拮抗作用。NK细胞积极参与抗巨细胞病毒感染的全过程。NK活性高，但不一定有保护性反应，但有活动性感染的证据。NK细胞不能阻止原发性巨细胞病毒感染的发生，但一旦NK细胞被感染，巨细胞病毒感染的早期会限制传播，使感染受到限制。NK细胞和CTL细胞是抗CMV的重要效应细胞。在CMV复制的早期，在感染性病毒体产生之前，它们可以切割被感染的细胞，使病毒流产在细胞间传播。在小鼠模型中，病毒作用3-5天，由NK细胞介导的抗病毒作用被IFN增强。6-21天，脾和外周血细胞的细胞毒性CTL。NK细胞和CTL细胞的活性决定了巨细胞病毒感染的敏感性，感染后机体易于恢复。巨细胞病毒感染细胞、NK细胞和CTL细胞的活性也受到严重影响。此外，特异性细胞免疫可以预防CMV感染的复发。是检测巨细胞病毒感染的肾移植受者T细胞反应的发生情况，发现14巨细胞病毒有20个细胞毒反应，6个细胞毒反应有严重的临床后果。因此，特定T细胞的存在可以防止CMV感染的复发。
机体降低巨细胞病毒感染的毒力，可能是各种抗体的抗体。乳汁，宫颈分泌物，唾液，虽然特异性抗体，包括中和抗体。但是，仍然可以检测到巨细胞病毒抗体，这并不能阻止病毒的传播。宫内胎儿从母亲、受感染的产道或乳汁中被动获得的抗体，不能停止。研究表明，小鼠腹腔或静脉注射0.2毫升高效价抗CMV球蛋白，可完全保护动物在致死性CMV发作前免于死亡。CMV等。，然后二次发作，所有动物都还活着，说明抗体可以降低巨细胞病毒的毒性。
孕妇感染巨细胞病毒会怎么样？
孕妇感染巨细胞病毒，可通过胎盘感染胎儿，引起先天性感染、流产、死产。
先天性感染的婴儿可能没有症状，但一些严重的病例可能涉及多个器官，甚至导致死亡。症状可表现为肝脾肿大、黄疸、瘀点或特发性血小板减少性紫癜、脉络膜视网膜炎和小头症。所有的孩子都会有不同程度的听力下降、视力下降、意识模糊、运动障碍、智力低下等。出生后通过产道或母乳喂养感染为获得性感染，症状较轻，预后较好，肝功能异常，个人。
[临床表现]
巨细胞病毒感染的症状有哪些？
大多数健康成人巨细胞病毒感染无明显临床症状，部分患者可出现传染性单核细胞增多症、表现、发热、乏力、咽痛、淋巴结肿大、肌肉疼痛、多发性神经炎、外周血异型淋巴细胞和脾肿大等症状。
妊娠期胎儿宫内感染易发生自然流产，并可能损害死胎或早产。新生儿症状可见肝脾肿大、黄疸、肝炎、血小板减少性紫癜、溶血性贫血、神经系统变性、小头畸形、智力低下、视力和听力损害。
新生儿感染可无全身症状，有的仅表现呼吸障碍症状，有的肝功能异常。没有神经损伤。
巨细胞病毒感染的自然史非常复杂。原发感染排毒后，往往需要几周、几个月甚至几年，然后才是潜在感染。经常反复感染，排毒。即使潜伏病毒在初次感染多年后被重新激活，再次感染时也可能出现不同抗原性的病毒株。巨细胞病毒感染的临床表现与个体的免疫功能及其年龄有关。如表2所示，医源性感染的症状和体征是多种多样的，无论是来自垂直传播、平行传播还是医源性感染。
表2CMV传染病临床病程和疾病类型(拜尔罗彻)
严重类型:黄疸、贫血、肝脾肿大、血小板减少、新生儿感染(先天性)
紫癜减少、中枢神经系统侵犯、肺炎、心肌炎)
乙.轻度型:假死、心脏肥大、高胆红素血症。
2。出生和哺乳后无症状期的CMV再感染(先天性/获得性？)
A.全身
乙.c型呼吸系统(百日咳样)肝脾肿大
。胃肠型
肾型？
3。获得型
一个。甲型流感
乙.单核细胞增多症类型
呼吸型
d .胃肠戊型肝炎
f .由于特殊医疗防卫能力低下。
迪克。无症状？
4.1，2，3关于巨细胞病毒感染的远期后果，常见于输注单核细胞后伴有临床组织细胞增多症，由于免疫功能障碍、智力低下和运动迟缓。
血管、视网膜炎症、肺炎和胃肠道感染。大多数格-帕综合征患者。
[诊断]
如果巨细胞病毒感染的临床表现不能确诊，就要依靠实验室参照从临床标本中分离出一种病毒(或特异性抗体升高4倍以上或抗体滴度持续升高)才能确诊。
病毒分离法
将最好的唾液、尿液、生殖道分泌物、乳汁、白细胞接种到人成纤维细胞中进行繁殖和分离。细胞病变效应(巨细胞固定和HE染色，CPE可以观察到)出现数天或数周。核内含物、核周晕和嗜酸性粒细胞胞质内含物，很像“猫头鹰眼”(猫头鹰眼)，也可以通过单克隆或多克隆抗体染色来检查。
最常用的两种方法是血清补体抗体检测。
综合试验(CF)、间接免疫荧光法(IIF)、免疫酶试验(EIA)、间接血凝试验(IHA)和放射免疫分析法(RIA)。在取单份血清样本确定巨细胞病毒感染史时，应立即留取血清样本，并间隔2周、4周、8周，再留取结合病毒分离的血清样本，可用于原发感染的诊断。
DNA探针
CMV的32P标记探针已经被广泛使用，并且一些样品，混合是比病毒分离更敏感的方法，其用于最敏感的检测。
聚合酶链式反应
(1)标本收集和处理
收集样本，包括患者的血液、尿液和腺体组织。全血制备的血沉棕黄层可在-80℃保存。尿样可以保存在液氮中。冷冻标本应避免反复冻融。
将尿样以2500转/分钟离心65438±00分钟，以去除细胞碎片并收集上清液。预处理后的尿液中含有PCR抑制剂，如所需的聚乙二醇(PEG 6000): 50？l尿上清液和50？20% peg 6000和25 l？L-2 mol/L NaCl，混合后置于冰浴中6小时；以15000转/分钟的速度离心30分钟，收集沉淀物。以6400转/分钟离心3分钟；尽可能通过抽吸去除上清液，并将沉淀物悬浮在蒸馏水中。悬浮液可直接用于PCR扩增，扩增物应在100℃加热10分钟，并在快速冰浴中冷却。
(b)制备的模板DNA
1。从血样中制备模板DNA
a:加入NaCl使血清中葡萄糖的终浓度为1.50 mmol/L；10?l血清在70℃45秒直接PCR扩增。
方法B:制备的血沉棕黄层(BCP): (1) BCP，收集沉淀并用PBS洗涤两次。②加500？？6mol/L盐酸胍的匀浆。③加30？？10毫摩尔/升EDTA，10毫摩尔/升NaCl，30？L20%%十二烷基肌氨酸钠和5？,?蛋白酶K(10mg/ml)，混合并在60℃反应1h。④加1130？l乙醇沉淀65438±0小时，-20℃。⑤离心收集沉淀的DNA。⑥用70%乙醇洗涤两次，最后将沉淀物悬浮于10 mmol/L Tris-HCl和1mmol/L EDTA中。4℃备用。
2。模板DNA:①用于冰冻组织标本制备:①冰冻切片机切5到10吗？将冷冻组织块置于1.5ml塑料管中。(2)向准备好的缓冲液中加入10%福尔马林溶液。③10分钟1？2分钟，轻轻倒出上清液，离心，用乙醇沉淀，洗涤两次。④室温10干燥？60分钟⑤加入提取缓冲液(100mmol/L的Tris-盐酸，4 mmol/L的EDTA，8.0400g/mL的蛋白酶K)，从而捣碎刚刚浸没的沉淀物(约50至100 L)。福尔马林固定，石蜡包埋组织脱蜡干燥，请点击此处。⑥置于37℃的液体中。⑦放入沸水中7分钟灭活蛋白酶K⑧离心收集上清液，取1？10?l可以通过PCR扩增。
3。尿样制备模板DNA: ① 100？l尿液上清液含100？L 6 mol/L异硫氰酸胍，7？L 2mol/L NaCl和20？l玻璃粉悬浮液(DNA制备，日本东京朝日玻璃公司)。(2)室温搅拌65438±00分钟，6400转/分钟离心2分钟，收集沉淀。③用50%乙醇、10 mmol/L Tris-HCl和50 mmol/L ph 7.4 NaCl洗涤沉淀物一次，以6400r/min离心1分钟。④用水洗涤相同的沉淀物两次，收集沉淀物。⑤加50？55℃蒸馏水65438±05分钟。⑥15000 r/min离心2分钟，收集上清液(含巨细胞病毒DNA)，进行PCR扩增，然后将悬液在100℃加热10分钟，冰浴快速冷却。关于
(三)引物和探针
引物和探针的设计基于巨细胞病毒立即早期蛋白基因启动子区四个外显子的序列、晚期抗原gp64基因和磷酸化蛋白pp71基因的序列。表3列出了中常用的引物和探针。
(4)PCR扩增步骤
1.10×反应缓冲液:100 mmol/L Tris-盐酸，pH为8.4的KCl，500 mmol/L，25 mmol/L氯化镁，2 mg/ml明胶。
Taq DNA聚合酶:5U/？长度
10×dNTP浓度:四种dNTP的每一种浓度为2.0 mmol/L。
引物:100pmol/L
2。常规PCR扩增
10×反应缓冲液反应混合物(50升)？大型的
10×dNTP？？
5的模板DNA？升高
Taq DNA聚合酶0.2？升(国际单位)
每种底漆0.5？升高
蒸馏水3.8？升高
加1？两滴矿物油。
将反应混合物加热至94℃5分钟，然后30秒，在95℃和55℃的40秒内，在72℃加热60秒，进行35至40个扩增循环。
表3用于CMV PCR扩增的引物和探针
底漆
调查
序列(5’→3’)位置
碎片的
大小
IE1 CCACCCGTGGTGCCAGCTCC
早期基因
159(BP)
IE2
CCCGCTCCTCCTGAGCACCC
IE3(探针)
ctggtgtcacccccagagtcccctgtacccgcgacttcc
LA1
CCGCAACCTGGTGCCCATGG
GP64后期139
LA2 CGTTTGGGTTGCGCAGCGGG
LA3(探针)
ttcttctgggacgccacacacatctaccatcttcgccgg外显子1/>；139
IE1b
GGAATCCGCGTTCCAATGCA
IE1a
AGATCGCCTGGAGACGCCAT
早晨
/& gt；IE2a
ATGGAGTCCTCTGCCAAGAG
早期外显子2
七十二个
IE2b
CCGTGGCACCTTGGAGGAAG
IE3a
& gtGTGACCAAGGCCACGACGTT
3月初外显子
167
IE3b
tctgccagaggacatctttctc
IE4a
ACAGATTAAGGTTCGAGTGC
4月初外显子
179
IE4b
CAATACACTTCATCTCCTCG
IE4c
TTACCAAGAACTCAGCCTTC
早期基因第4外显子
& gt158
IE4d
gtgcgtgagccaccttgtctc
IE4e tatacccagacggaagaagaaaattca
早期基因第4外显子
426
IE4f
ATAAGCCATAATCTCATCAGGGGAG
PP1A
TAGCGCGCATACATCCCGAGTACAT & ltBR/PP71基因
316
Pp1b
ATGACGTTGCTCCGTGGAAAGAGACC
Pp71
3。巢式PCR扩增:①同一成分(2)在反应混合物中，只有引物IE2a和IE4b(包括全外显子3的721B)，各100pmol。在94℃60秒，150秒，52℃72℃480秒，扩增进行了20个循环。②取2？对于L的扩增产物，向每个引物中加入100pmol的IE3a和IE3b。然后在94℃60秒，150秒，52℃72℃180秒，进行20个循环的扩增。
(e)产品标识
扩增分析的产物可以是固相杂交和液相杂交试验(膜)。
1。固相杂交:
①预杂交液为3×SSPE、5×登哈特、0.5%SDS和25%甲酰胺。膜的扩增产物在42℃预杂交30分钟。60分钟②加入标记探针(10cpm/G，2ng/ml)并混合30？60分钟③ 0.2× sspe.01% SDS室温洗膜3次，5分钟/次，60℃，10分钟/次，再室温洗1次以上，5分钟/次。④放射自显影。
2。液相杂交和凝胶电泳:
①取1/10体积扩增产物在0.5？1.0皮摩尔在探针处混合。②加入氯化钠、钠、磷酸和葡萄糖终浓度为150mmol/L的EDTA溶液，使总体积为20？？③95℃时10分钟，然后56℃时60分钟..④将加入的样品缓冲液离心65，438+00秒，在8%聚丙烯酰胺凝胶上电泳。⑤电泳后溴化乙锭染色，然后X线胶片放射自显影。
HCMV DNA分子的碱基序列还没有找到。虽然其DNA限制性内切酶片段长度是多态性的，但其基因组中的离散性尚不清楚。可以确定90%的人巨细胞病毒野生型菌株可以通过使用单一引物对的PCR扩增；使用两组以上具有不同HCMV序列的引物，几乎可以检测所有的病毒株。因此，在这种情况下，通过PCR，引物位于基因组不同区域的两对或更多对中。
在HCMV模板DNA的制备过程中，有时会产生一些小的DNA片段，PCR反应往往会产生一定程度的底产物，从而影响测定结果。在这种情况下，可以采用巢式PCR法，其基本原理是目的DNA的扩增分两步:首先用一对引物扩增目的DNA，包括长DNA片段，然后引物扩增的少量目的DNA只进行第二次扩增。通过控制每个步骤，可以防止由小DNA片段引起的假阳性的扩增循环数。这种方法也可以避免假阴性结果。
通过PCR检测HCMV样本是高度敏感的。相当于几十个病毒DNA分子或者1？5PFU可以检测到HCMV感染组织培养物上清液中病毒的DNA序列。扩增产物的Southern杂交分析尿样可检测到1水平的pghcvmv DNA序列；利用该系统，仅在4×104细胞的病毒基因组中可检测到点杂交，比非放射性寡核苷酸探针高2×103倍。
PCR技术在检测HCMV感染中的临床应用价值，因为出现临床前症状或感染的血清学证据时，体液中的病毒DNA可作为HCMV感染的早期指标。HCMV感染通过胎盘和产道感染传播，受感染新生儿死亡率高。所以通过PCR早期诊断及时治疗，产前产后护理也是非常重要的。这种方法也可用于鉴定HCMV和许多严重患病的器官或组织移植供体之间的关系。另外，PCR可以检测稳定性指标，但也有半定量分析，所以可以作为评价各种抗病毒疗效的手段。
[治疗]
在孕早期发现原发巨细胞病毒感染，尽早终止妊娠。孕晚期如有感染，应进一步检查胎儿畸形情况，并采取相应的治疗措施。抗病毒治疗或先天性巨细胞病毒病的临床症状。如阿糖胞苷、磺胺类、干扰素等，但效果还有待进一步观察。关于
治疗巨细胞病毒感染，可用于各种抗病毒制剂，如GCV、抗巨细胞病毒免疫球蛋白制剂、干扰素和转移因子。但这些药物不会从根本上解决问题，停药后往往会反弹。这种病毒的潜伏病毒可作为艾滋病的病因之一，各国学者致力于控制其感染。美国学者最近研发了两种活疫苗，第一次试验后效果相当不错。一种是由AD169病毒株制成的，另一种是由甄珍病毒株制成的，这两种病毒株已经清楚地显示了抗巨细胞病毒的功效。胃肠外给药后，巨细胞病毒抗体增加，从而增强机体免疫功能。
[预防]
巨细胞病毒对人类的危害很大，要积极预防。
(1)锻炼健身意识。提高免疫功能和抗病能力，尤其是女性的生育年龄，以减少巨细胞病毒对胎儿的严重危害。
(2)我们需要保护怀孕或患有慢性消耗性疾病、免疫功能低下的患者，让他们远离传染源。
(3)注意环境卫生、饮食卫生。
(4)乳汁巨细胞病毒阳性不宜母乳喂养。
(5)免疫预防。还在研究探索中。
临床症状、年龄、患者身体状况、感染途径都有很大差异。
继续......
目前对巨细胞病毒感染没有有效的治疗方法。
由于先天性巨细胞病毒感染和致癌作用，一些学者认为疫苗可以预防CMV感染。由于技术限制，但无法培育，经济实用，贵死贵。CMV疫苗在镇上的有效应用命名为减毒活疫苗。
参考资料:
你知道潜伏性巨细胞病毒感染的元凶吗？关于
人巨细胞病毒(CMV)是一种双链DNA病毒，是最大的动物病毒之一。人只感染人巨细胞病毒。相对较弱，因为其他病毒人巨细胞病毒的毒力一般不会侵入人体器官组织而严重受损，但与受精卵相关的病毒基因整合可能会阻止或影响复制和