吸附柱色谱的原理是什么?

1,吸附柱色谱

吸附色谱原理:在一定条件下,硅胶与待分离物质之间存在相互作用,主要是物理和化学作用。物理相互作用来自硅胶表面和溶质分子之间的范德华力。化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键。

色谱管是具有均匀内径和收缩下端的刚性玻璃管。下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装有吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持均匀,以确保良好的分离效果。除非另有说明,通常使用直径为0.07 ~ 0.15 mm的颗粒。色谱柱的尺寸、吸附剂的种类和剂量以及洗脱过程中的流速都在每个品种下进行了规定。

2.分配柱色谱法

该方法与吸附柱色谱法基本一致。装柱前,先将载体和固定液混合,然后多次移入色谱柱,用带平面的玻璃棒压紧;可将样品溶解在固定液中,与少量载体混合,加入预制的色谱柱上端。洗脱液需要与固定液混合使其饱和,以避免洗脱过程中两相分布的变化。

扩展数据:

色谱柱的大小和规格由待分离样品的量和吸附的难易程度决定。一般柱管直径为0.5 ~ l0 cm,长度为直径的10 ~ 40倍。吸附剂的装填量约为样品重量的20 ~ 50倍,柱高应占柱管高度的3/4。柱子太长太细或者太粗太短都不好。

装柱前,应将柱清洁干燥,并垂直固定在铁架上。将少量洗脱液注入柱内,取一小团玻璃棉或脱脂棉,用溶剂润湿后塞入管内,然后用长玻璃棒轻轻送至底部,适当按压,将棉球内的气泡驱出,但不可过紧,以免阻碍溶剂的顺利流动(如果管内有筛板,可省略此步骤)。然后在上面加一层约0.5厘米厚的干净细沙,从对称方向轻轻敲击柱管,使沙面光滑。

常用的包装方法有两种:干包装和湿包装。

1.干装法:将2/3的溶剂装入柱中,在管口上放一个漏斗,打开活塞,让溶剂慢慢滴入锥形瓶中,然后通过漏斗将干燥的吸附剂以细流的形式倒入柱中,用套在玻璃棒(或铅笔等)上的橡皮塞轻轻敲击柱子。)使吸附剂均匀沉降到底部。

填充后,用滴管吸取少量溶剂,将附着在管壁上的吸附剂颗粒冲入柱内,继续敲击管道,直至柱不再下沉。在圆筒上覆盖一层薄薄的干净细沙,将圆筒上的液层高度降低到0.1 ~ l cm,然后将收集的溶剂通过圆筒反复循环几次,从而得到一个比较致密的圆筒。

2.湿式装填法:这种方法与干式装填法相似,但不同的是,装填前需要将吸附剂预先用溶剂配成浆液,并在倾倒浆液时尽可能连续、均匀地完成。如果色谱柱较大,吸附剂应事先浸泡在一定量的溶剂中,充分搅拌过夜(排除气泡)后再上样。

无论干装填法还是湿装填法,装填的色谱柱都要装填均匀,松紧适宜,不能有气泡和裂纹,否则洗脱液会不规则流动,形成“窜流”,造成色谱带变形,影响分离效果。

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