SDS-PAGE电泳的原理是什么？

作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种具有分子筛效应的网状结构。它有两种形式:一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质在电泳中保持完整，其中根据蛋白质大小、形状、电荷三个因素分离蛋白质。

然而，SDS-PAGE仅根据蛋白质的分子量亚基来分离蛋白质。这项技术最早是夏皮罗在1967建立的。他们发现蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基的分子量，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，电荷因子可以忽略。

SDS是一种阴离子洗涤剂。作为变性剂和增溶剂，可以断裂分子内和分子间的氢键，使分子展开，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。强还原剂，如巯基乙醇和二硫苏糖醇，可以破坏受阻胱氨酸残基之间的二硫键。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子解聚成多肽链，解聚的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白质-SDS胶束，带很大的负电荷。

SDS-PAGE一般采用非连续缓冲体系，比连续缓冲体系分辨率高。

浓缩凝胶具有聚集作用，凝胶浓度小，孔径大。当稀释的样品加入到浓缩的凝胶中时，它通过大孔凝胶的迁移浓缩到一个狭窄的区域。当样品溶液和浓缩凝胶为TRIS/HCL缓冲液时，电级液体为TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量甘氨酸离子。蛋白质带负电，所以一起向正极移动。其中氯离子最快，甘氨酸离子最慢，蛋白质居中。电泳开始时，氯离子的迁移率最大，超过了蛋白质，于是在其后面形成一个低电导区，电场强度与低电导区成反比，从而产生较高的电场强度，使蛋白质与甘氨酸离子快速移动，形成稳定的界面，使蛋白质在移动界面附近聚集，凝结成中间层。