SDS-PAGE电泳的原理是什么?

作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种具有分子筛效应的网状结构。它有两种形式:一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶,蛋白质在电泳中保持完整,其中根据蛋白质大小、形状、电荷三个因素分离蛋白质。

然而,SDS-PAGE仅根据蛋白质的分子量亚基来分离蛋白质。这项技术最早是夏皮罗在1967建立的。他们发现蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基的分子量,在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后,电荷因子可以忽略。

SDS是一种阴离子洗涤剂。作为变性剂和增溶剂,可以断裂分子内和分子间的氢键,使分子展开,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。强还原剂,如巯基乙醇和二硫苏糖醇,可以破坏受阻胱氨酸残基之间的二硫键。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子解聚成多肽链,解聚的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白质-SDS胶束,带很大的负电荷。

SDS-PAGE一般采用非连续缓冲体系,比连续缓冲体系分辨率高。

浓缩凝胶具有聚集作用,凝胶浓度小,孔径大。当稀释的样品加入到浓缩的凝胶中时,它通过大孔凝胶的迁移浓缩到一个狭窄的区域。当样品溶液和浓缩凝胶为TRIS/HCL缓冲液时,电级液体为TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量甘氨酸离子。蛋白质带负电,所以一起向正极移动。其中氯离子最快,甘氨酸离子最慢,蛋白质居中。电泳开始时,氯离子的迁移率最大,超过了蛋白质,于是在其后面形成一个低电导区,电场强度与低电导区成反比,从而产生较高的电场强度,使蛋白质与甘氨酸离子快速移动,形成稳定的界面,使蛋白质在移动界面附近聚集,凝结成中间层。